Tat-Vp3融合蛋白在杆状病毒-昆虫细胞表达系统中的表达与纯化及其促凋亡功能的研究
谭婷
刘芸
罗海华
李翠
姜勇
1.南方医科大学病理生理教研室，广东省蛋白质组学重点实验室，广东 广州 5105152.南方医科大学病理生理教研室，广东省蛋白质组学重点实验室，广东 广州 5105153.南方医科大学病理生理教研室，广东省蛋白质组学重点实验室，广东 广州 5105154.南方医科大学病理生理教研室，广东省蛋白质组学重点实验室，广东 广州 5105155.南方医科大学病理生理教研室，广东省蛋白质组学重点实验室，广东 广州 510515
摘要：目的：采用杆状病毒-昆虫细胞表达系统获取可溶性 His-Tat-Vp3融合蛋白,并观察其对细胞增殖和凋亡的影响。方法：构建重组质粒 pFastBacTM1-TAT-VP3,转化DH10Bac 感受态细胞,获得杆状病毒质粒,转染 Sf9昆虫细胞,得到重组杆状病毒,纯化并扩增该病毒。用最适滴度的病毒刺激 Sf9细胞以诱导 His-Tat-Vp3蛋白表达,经 SDS-PAGE和 Western bolt鉴定,获得分子质量约21 kDa 的融合蛋白。采用 MTT 实验与流式细胞技术检测500、1000、2000 nmol/L的融合蛋白抑制肿瘤细胞(HeLa细胞)增殖及促凋亡的活性。结果：通过昆虫表达系统成功表达及纯化出Tat-Vp3融合蛋白,其中1000、2000 nmol/L融合蛋白组可显著抑制肿瘤细胞的增殖,并提高细胞的凋亡率。结论：成功构建 His-TAT-VP3融合蛋白昆虫系统表达载体,在昆虫表达系统中可诱导性可溶性高表达,所获融合蛋白能显著抑制 H eLa细胞的增殖,并促进其凋亡。
关键词：细胞穿透肽民凋亡素杆状病毒-昆虫细胞表达系统增殖率凋亡
资助基金：国家自然科学基金(81030055)广东省自然基金项目(S2013010014422,S2011010003917,10251051501000003)高等学校博士学科点专项科研基金(20104433110008)广东省医学科学技术研究面上项目(A2013354)南方医科大学科研启动基金(B1012008)
论文发表日期：2014-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 7-12 )
英文信息