TMEM33 mRNA 3′-UTR报告基因载体的构建及功能验证
冯胜娟
吕晓武
刘真
李文婷
吴玉家
张亚洁
王瑞晨
曺令
邱亚斌
贾赤宇
1.解放军第三○九医院烧伤整形科,北京,1000912.解放军第三○九医院烧伤整形科,北京,1000913.解放军第三○九医院烧伤整形科,北京,1000914.解放军第三○九医院烧伤整形科,北京,1000915.解放军第三○九医院烧伤整形科,北京,1000916.解放军第三○九医院烧伤整形科,北京,1000917.解放军第三○九医院烧伤整形科,北京,1000918.解放军第三○九医院烧伤整形科,北京,1000919.解放军第三○九医院烧伤整形科,北京,10009110.解放军第三○九医院烧伤整形科,北京,100091
摘要：目的：：根据microRNA-146a(miR-146a)预测靶点构建荧光素酶报告基因重组质粒并进行功能验证,为研究吸入性损伤中 miR-146a通过靶向跨膜蛋白33(TMEM33)对 Toll 样受体/核因子-κB(TLRs/NF-κB)信号通路的调控作用提供前期的工作基础。方法：通过生物学软件预测 TMEM33 mRNA 3′端非翻译区(TMEM33 mRNA 3′-UTR)可能是miR-146a的作用靶点,将设计合成的TMEM33及其突变序列TMEM33-mu序列分别克隆至荧光素酶报告质粒,采用脂质体法将这两种重组荧光素酶报告质粒 pMIR-TMEM33和 pMIR-TMEM33-mu分别与miR146a mimics共转染 HEK-293T细胞,以 pMIR-TMEM33+miR-control 转染 HEK-293细胞作对照,双荧光素酶报告基因系统检测荧光素酶活性。结果：TargetScan 和 miRanda 软件预测显示,miR-146a 与TMEM33 mRNA 3′-UTR存在互补结合位点,构建的荧光素酶报告质粒经酶切及测序鉴定正确。双荧光素酶报告基因检测系统显示,miR-146a对TMEM33 mRNA 3′-UTR 具有靶向作用,pMIR-TMEM33+miR146a mimics组较 pMIR-TMEM33+miR-control 组荧光素酶活性降低62%左右,差异具有统计学意义(P<0.01)；而 miR-146a对TMEM33-mu 3′-UTR无靶向作用,pMIR-TMEM33-mu+miR-146a 组与 pMIR-TMEM33+miR-control组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论：成功构建 TMEM33mRNA 3′-UTR 荧光素酶报告载体,证实 miR-146a对TMEM33 mRNA 3′-UTR具有靶向调控作用,为从基因水平深入揭示吸入性肺损伤发病机制提供实验室数据和方法。
关键词：TMEM33荧光素酶报告基因微小 RNA-146a肺损伤吸入性
资助基金：国家自然科学基金(81372051)北京市自然科学基金(7122179)总参军事医学和老年病科研基金项目(ZCWS14B06)解放军第三○九医院院管课题(2014MS-001)国家重点基础研究发展计划（973计划）(2012CB518104)全军医学科技十二五重点课题(BWS11C061)北京市自然科学基金(7123229)中国博士后科学基金面上项目(2012M512081,2012M521846)
论文发表日期：2014-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 204-208 )
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