甜瓜蔗糖磷酸合成酶基因全克隆及工程载体的构建
侯丽霞1
何启伟1
赵双宜2
焦自高1
王崇启1
董玉梅1
1.山东省农业科学院蔬菜研究所2.山东大学生命科学院,济南,250100
摘要：蔗糖磷酸合成酶在甜瓜果实蔗糖合成途径中起关键性的调节作用,克隆该基因并导入甜瓜低糖自交系,可改良甜瓜果实品质创新优良种质.从甜瓜幼苗叶片提取总RNA,利用RT-PCR与Southern blot方法相结合.重组子质粒经限制性内切酶酶切和PCR验证以及测序同源性比较,克隆到基因的5'(2 859 bp)和3'(852 bp).应用高保真Taq聚合酶PCR拼接蔗糖磷酸合成酶完整cDNA序列3 692 bp.该片段与GenBank中其它植物基因序列具有97％～99％的同源性,登录号DQ364058.应用BamH Ⅰ、Kpn,Ⅰ、Ggl Ⅱ限制性酶切获得植物双元表达载体pROK2及基因的线性片段,通过T4连接酶反应,构建了以CaMV35S为启动子,以Tnos为终止子的工程载体pROK-SIS.该载体含有Npt-Ⅱ选择标记基因.
关键词：甜瓜蔗糖磷酸合成酶基因克隆工程载体
分类号：S652(瓜果园艺)
论文发表日期：2008-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 548-551 )
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