葡萄目标起始密码子多态性反应体系的优化
张君玉1
郭大龙1
龚莹1
刘崇怀2
李猛1
张国海1
1.河南科技大学林学院,河南洛阳,4710032.中国农业科学院郑州果树研究所,郑州,450009
摘要：SCoT标记是一种新型目的基因分子标记方法,采用L16(45)正交试验和单因素试验2种方法优化了葡萄SCoT-PCR反应体系,结果表明正交试验中关键影响因子为dNTPs浓度,单因素试验中为dNTPs和Mg2+浓度.综合2种方法,优化的葡萄SCoT-PCR反应体系为:Mg2+2.0 mmol·L-1、dNTPs 0.3 mmol·L-1、Taq酶1.0 U、引物0.3 μmol·L-1、DNA模板30 ng,总体积20 μL.扩增程序为:94℃预变性5 min;94℃变件1 min,54℃退火1 min,72℃复性2 min,34个循环;最后72℃延伸8 min.该反应体系在20个葡萄品种的验证中表现出良好的稳定性和可重复性,该反应体系的建立为葡萄种质遗传多样性评价、基因组分析、指纹图谱构建、分子标记辅助选择育种等研究提供了新的技术手段.
关键词：葡萄SCoT正交设计单因素试验体系优化
分类号：S663.1(果树园艺)
资助基金：30800742(NSFC)河南省教育厅自然科学研究项目(2009B210003)国家葡萄产业技术体系项目(nycytx-30-zy-01)
论文发表日期：2011-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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