‘泽西’越橘VcDFR基因的克隆与表达分析
宋杨1
窦连登1
张红军1
张志东2
李亚东2
1.中国农业科学院果树研究所·农业部园艺作物种质资源利用重点实验室,辽宁兴城1251002.吉林农业大学园艺学院,长春130118
摘要：[目的]克隆‘泽西’越橘的VcDFR基因,对其进行表达模式分析,构建VcDFR基因的原核表达载体并在大肠杆菌DE3中诱导表达,为探讨越橘VcDFR基因的表达与花青苷生物合成之间的关系奠定基础.[方法]以越橘果实总RNA为模板,利用同源克隆法获得越橘VcDFR基因.利用实时定量RT-PCR分析VcDFR基因在‘泽西’越橘不同组织器官中和果实发育过程中的相对表达量,并测定不同组织中和果实发育过程中的花青苷含量.将获得的越橘VcDFR基因克隆到原核表达载体pET-30a(+)上,构建原核表达载体pET-30a (+)-VcDFR,在大肠杆菌DE3中诱导表达.[结果]从越橘果实中克隆到1条VcDFR基因.序列分析显示VcDFR基因具有保守的NADPH结合域和底物特异结合区.实时定量RT-PCR分析表明,VcDFR在枝条、叶片、果肉、果皮和花中均能表达,但在不同组织中的相对表达量差异明显,在果肉和果皮中表达量较高.与其他组织器官相比较,果肉和果皮中花青苷含量较高.在果实发育过程中,随着VcDFR表达的升高,果肉中花青苷含量呈递增的趋势.使用SDS-PAGE电泳和Western-blot检测构建的融合表达蛋白,结果表明融合表达的VcDFR蛋白与预期大小一致.[结论]‘泽西’越橘果实中VcDFR的表达与花青苷的生物合成有一定关系,VcDFR的表达促进了花青苷含量的增加.VcDFR在大肠杆菌中的融合表达,为进一步鉴定该蛋白及研究其功能奠定了基础.
关键词：’泽西’越橘二氢黄酮醇还原酶基因基因表达分析原核表达
分类号：S663.9(果树园艺)
资助基金：国家自然科学基金(31301754)中国农科院基本科研业务费专项预算增量项目(2013ZL018)吉林省财政厅育种项目(2012004)公益性行业(农业)科研专项(201103037)吉林省科技发展计划(20080713)
论文发表日期：2014-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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