‘小白杏’自交不亲和SFB基因的克隆及其表达载体的构建
刘海楠1
冯建荣1
李文慧1
罗明2
刘小芳1
孙军利1
1.石河子大学农学院·特色果蔬栽培生理与种质资源利用兵团重点实验室,新疆石河子8320002.西南大学生物技术中心·农业部生物技术与作物品质改良重点开放实验室,重庆北碚400715
摘要：[目的]利用基因工程技术改良杏自交不亲和性状,为培育自交亲和杏品种奠定基础.[方法]以新疆自交不亲和杏品种‘小白杏’(Prunus armeniaca L‘Xiaobaixing’)的花粉为材料,通过RT-PCR(Reverse Transcription PCR)和3’RACE (Rapid Amplification of cDNA Ends)技术克隆SFB基因(S-haplotype-specific F-box protein)片段.以克隆载体pMD19-T为基础,结合pBS-T上的酶切位点,利用酶切连接的方法将SFB基因的ORF框正向重组到表达载体pCAM-BIA-35S-MCS-NOS-NPTII的KpnI和SacI酶切位点之间,构建SFB基因正义表达载体pCAMBIA-S-SFB;将SFB基因的ORF框反向重组到表达载体的KpnI和SalI酶切位点之间,构建SFB基因反义表达载体pCAMBIA-A-SFB;用电击转化法将重组质粒转化至农杆菌菌株(Agrobacterium tumefaciens)LBA4404中.[结果]通过RT-PCR和RACE技术获得了1136 bp SFB基因片段(GenBank登录中),其中含912 bp ORF框(Open Reading Frame),由它推导的氨基酸序列与蔷薇科SFB基因高度同源,具有F-box结构域、2个变异区和2个高变区的完整结构;表达载体酶切检验结果表明,SFB基因的ORF框正确地插入pCAMBIA-35S-MCS-NOS-ⅣPTII的启动子和终止子之间,表明SFB基因的正、反义表达载体构建成功;特异引物PCR验证结果也表明重组质粒已经成功转入农杆菌LBA4404中[结论]研究的结果为利用基因工程技术改良杏自交不亲和性状、培育自交亲和杏品种的遗传转化提供了载体.
关键词：杏自交不亲和SFB基因表达载体
分类号：S662.2(果树园艺)
资助基金：国家自然科学基金(31272129)
论文发表日期：2015-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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