‘小白杏’自交不亲和SFB基因RNAi表达载体的构建
刘海楠1
冯建荣1
罗明2
刘小芳1
李文慧1
白茹1
1.石河子大学农学院·特色果蔬栽培生理与种质资源利用兵团重点实验室,新疆石河子8320002.西南大学生物技术中心·农业部生物技术与作物品质改良重点开放实验室,重庆北碚400715
摘要：[目的]应用RNA干扰(RNAi)技术在分子水平调控杏自交不亲和性状,为培育自交亲和杏品种奠定基础.[方法]基于南疆自交不亲和杏品种‘小白杏’(Prunus armeniaca‘Xiaobaixing’)花粉决定子SFB(S-haplotype-specific F-boxprotein)基因3’端cDNA全长序列,选取SFB基因变异区上游距起始密码子61 bp处、大小为29 bp的片段作为干扰序列,棉花基因组DNA 242 bp的序列作为间隔片段,利用融合PCR (Fusion PCR)构建SFB基因发卡结构(intron-con-taining hairpin RNA,ihpRNA),再酶切连接到植物表达载体pCAMBIA-35S-MCS-NOS-NPTII上,构建SFB基因RNAi表达载体;用冻融转化法将重组质粒转化至农杆菌菌株(Agrobacterium tumefaciens)LBA4404中.[结果]测序结果表明臂长29 bp、茎环242 bp的SFB基因ihpRNA结构融合成功,双酶切检验和PCR验证结果表明,该结构正确地插入pCAMBIA-35S-MCS-NOS-NPTII的启动子和终止子之间,说明SFB基因的RNAi表达载体pCAMBIA-RNAi-SFB构建成功;PCR验证和测序结果也表明重组质粒已经成功转入农杆菌LBA4404中.[结论]研究结果表明,应用融合PCR结合酶切连接的方法构建SFB基因的RNAi表达载体是可行的,为RNAi技术在果树自交不亲和性状改良上的应用创造了条件.
关键词：杏自交不亲和SFB基因RNAi表达载体
分类号：S662.2(果树园艺)
资助基金：国家自然科学基金(31272129)
论文发表日期：2016-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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