梨SCoT-PCR反应体系的优化及‘库尔勒香梨’营养系变异鉴定
和世玉1
牛建新2
马建江3
1.石河子大学农学院园艺系,新疆石河子832003;特色果蔬栽培生理与种质资源利用兵团重点实验室,新疆石河子832003;南阳农业职业学院,河南南阳4730002.石河子大学农学院园艺系,新疆石河子832003;特色果蔬栽培生理与种质资源利用兵团重点实验室,新疆石河子8320033.新疆生产建设兵团第二师农科所,新疆库尔勒,841000
摘要：[目的]建立稳定性好、可重复性强、多态性扩增效果好的‘库尔勒香梨’SCoT-PCR反应体系,证明SCoT分子标记可以用于梨属植物优良营养系的鉴定.[方法]以新疆库尔勒农二师29团、33团和34团的‘库尔勒香梨’优良营养系为试材,通过L25(56)正交试验设计对‘库尔勒香梨’SCoT-PCR反应体系进行筛选,并对扩增反应程序进行优化,运用正交设计直观分析法和正交设计助手Ⅱ软件对正交设计扩增结果进行分析,从筛选出的20个引物中随机选择2条引物对24份材料扩增,用DNAMAN、Editseq、ORF Finder和NCBI-BLAST-tblastx对测序结果分析.[结果]优化后的香梨SCoT-PCR 20 μL反应分析体系含(2.5 mmol· L-1 10×buffer with Mg2+)2.5 μL、Taq酶1.5 U、引物10 μmol·L-1、模板DNA25 ng、dNTPs 1.6 mmol· L-1.反应程序为94℃预变性4 min;94℃变性1 min,52℃退火45 s,72℃延伸1 min,30次循环;72℃延伸8min.对测序结果分析表明:扩增产物的大小为200～2 000 bp,23份材料与对照材料存在单碱基的缺失,利用单碱基变异可以区分出24份材料,说明18份优良营养系材料发生了遗传变异.[结论]SCoT分子标记可用于梨树营养系变异的鉴定.
关键词：’库尔勒香梨’SCoT分子标记正交设计体系优化优良营养系
分类号：S661.2(果树园艺)
资助基金：兵团科技人员服务南疆专项(2010GG59)兵团科技攻关计划(2011BA003-3)
论文发表日期：2016-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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