沙梨PpGAI3基因的分离与原核表达分析
刘杭
王芳
李亮
王文婷
杨贺忠
马鑫瑞
吴少华
李永裕
摘要：[目的]分离沙梨DELLA蛋白编码基因PpGAI3,探究其蛋白在花芽休眠中的表达情况.[方法]从不同需冷量沙梨品种‘蜜雪梨’和‘黄花梨’中分离PpGAI3基因,重组到pEASY-Blunt E1表达载体中,转化BL21 (DE3)宿主菌后经IPTG诱导表达,并对表达菌株进行SDS-PAGE和Western blotting检测.[结果]获得2种沙梨的PpGAI3基因,分别命名为PpGAI3mx和PpGAI3hh,GenBank登录号为KU954535和KX078215,其开放阅读框(ORF)为1 641 bp,编码546个氨基酸,预测其为亲水性不稳定蛋白.进化树分析表明PpGAI3mx和PpGAI3hh与白梨的亲缘关系最近;成功构建了pEASY-Blunt E1-PpGAI3原核表达载体,得到蛋白分子质量约60 ku的诱导表达产物.[结论]所得沙梨DELLA蛋白编码基因PpGAI3为植物DELLA蛋白家族中的成员,在梨花芽休眠过程中具有特异表达,且表达产物大部分以不溶性包涵体形式存在.
关键词：沙梨休眠DELLA蛋白PpGAI3原核表达
分类号：S661.2(果树园艺)
论文发表日期：2017-01-01
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