柑橘体细胞胚发生基因CsHB1特异肽段多克隆抗体的制备及其蛋白动态检测
谢幸男1
赖晓娜2
战爽2
程来超2
许全全2
葛晓霞2
1.武汉生物工程学院应用生物技术研究中心,武汉430415;华中农业大学园艺林学学院,武汉4300702.武汉生物工程学院应用生物技术研究中心,武汉,430415
摘要：[目的]构建柑橘HD-ZIP Ⅱ转录因子CsHB1基因的原核表达系统,制备多克隆抗体,并检测抗体在‘伏令夏橙’胚性愈伤体胚诱导阶段中的特异性,为研究CsHB1基因在柑橘体细胞胚发生过程中的功能奠定基础.[方法]构建柑橘HD-ZIP Ⅱ转录因子CsHB1基因的原核表达载体pGEX4T-CsHB 1-N,转化大肠杆菌诱导目的融合蛋白的表达,并制备获得多克隆抗体anti-CsHB 1-N.通过Western blot检测抗体在原核表达系统和柑橘体细胞胚诱导阶段的特异性,并分析体细胞胚诱导阶段CsHB1蛋白水平表达的动态变化.[结果]重组原核表达载体pGEX4T-CsHB1-N在Esche-richia coli中高效表达出了分子质量约为49 ku的GST-CsHB 1-N融合蛋白,并纯化获得多克隆抗体anti-CsHB1-N;经过Western blot分析表明,多克隆抗体可与‘伏令夏橙’愈伤体胚诱导阶段表达的目的蛋白特异结合;蛋白表达结果分析表明,在胚性愈伤组织中CsHB1蛋白呈现高的表达量,随着诱导培养的进行,呈现了先下降后上升的波动变化.[结论]多克隆抗体特异性好,可与‘伏令夏橙’胚性愈伤组织中目的蛋白特异性结合,可用于CsHB1基因功能分析.
关键词：柑橘CsHB1多克隆抗体动态分析
分类号：S666(果树园艺)
资助基金：国家自然科学基金(31201611)湖北省自然科学基金(2016CFB390)
论文发表日期：2017-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 1069-1075 )
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