杜梨PbNHX1基因的克隆、表达分析及功能验证
刘威
李慧
蔺经
杨青松
常有宏
摘要：[目的]克隆1个杜梨Na+/H+逆向转运蛋白基因PbNHX1,并对其序列特征、表达特点及功能进行研究.[方法]采用RT-PCR和PCR克隆PbNHX1的cDNA和DNA序列,利用生物信息学方法进行序列分析,定量PCR检测其在非生物胁迫下转录水平变化,酵母互补试验检测PbNHX1基因的离子转运能力.[结果]杜梨PbNHX1基因cDNA编码区长1 704 bp,对应基因组DNA序列长3 594 bp,由13个外显子和12个内含子组成,编码蛋白含567个氨基酸.系统进化树显示,PbNHX1位于液泡膜型Na+/H+逆向转运蛋白分支上,与杨树液泡膜型Na+/H+逆向转运蛋白PtNHX1.3基因亲缘关系较近.正常生长条件下,PbNHX1在杜梨叶片中表达量高于根.施加200 mmol· L-1 NaCl、10％(φ)PEG6000或100 μmol·L-1 ABA后,PbNHX1在叶片中的转录水平持续上升;其在根中的表达量先升后降,表达高峰依次出现在处理后6、3和6h.PbNHX1的转入可恢复NaCl、KCl和潮霉素B对nhx1缺失酵母菌株AXT3的生长抑制,转基因酵母细胞中Na+和K+含量显著增加.[结论]PbNHX1具有植物NHXs基因家族的固有特征,对盐碱、渗透胁迫和ABA处理均存在转录响应,转入该基因能够提高酵母nhx1缺失突变体AXT3对盐胁迫的耐受能力,部分恢复其对阳离子的转运功能,从而促进Na+、K+积累.
关键词：杜梨PbNHX1基因序列特征表达特点酵母互补
分类号：S661.2(果树园艺)
论文发表日期：2018-01-01
页数：10( 137-146 )
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