杧果露水斑病病原菌枝状枝孢霉的巢氏PCR检测方法的建立
刘晓妹1
杨永利1
杨石有1
张贺2
朱朝华1
蒲金基2
1.海南大学热带农林学院·热带农林生物灾害绿色防控教育部重点实验室,海口5702282.中国热带农业科学院环境与植物保护研究所·农业部热带作物有害生物综合治理重点实验室,海口571101
摘要：[目的]杧果露水斑病是当前生产上影响杧果产业的重要病害之一,因潜伏期长常在发病初期不易被察觉而错过防治适期,建立其主要致病菌Cladosporium cladosporioides的快速准确检测方法,对于该病的早期诊断和及时防控尤为重要.[方法]将该病菌的ITS序列与NCBI中的数据大量比对后,在差异位点大的区域设计了8对引物,通过筛选获得两对特异性良好的引物及其扩增条件.[结果]两对特异性引物分别是ML-SF9/ML-SR5和ML-SF 10/ML-SR10,扩增条件:94℃4 min;94℃45 s,65℃45 s,72℃1 min,36周;72℃10 min,特异条带大小分别为408bp和424 bp.为了提高检测的灵敏度,又与真菌通用引物ITSl/ITS4结合后,建立了杧果露水斑病病原菌的两套巢式PCR快速检测体系,可检测病菌DNA的含量最低为3.55× 10-9 ng· μL-1,比常规PCR灵敏度提高了1万倍,且能实现对潜伏期果实的特异性检测.[结论]此技术操作简单、特异性强、灵敏度高,为杧果露水斑病的早期诊断提供了新方法.
关键词：杧果露水斑病菌常规PCR巢式PCR分子检测
分类号：S667.7(果树园艺)
资助基金：海南省自然科学基金(317031)国家重点研发计划(2017YFD0202100)海南省高等学校教育教学改革研究项目(Hnjg2016ZD-2)海南省高等学校教育教学改革研究项目(hdjy1606)
论文发表日期：2019-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 111-118 )
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