农杆菌介导的杜梨叶片瞬时转化方法的建立
李刚1
宋平丽1
王翔1
马青翠1
张海霞1
张玉星1
许建锋1
亓宝秀2
1.河北农业大学园艺学院,河北省梨工程技术研究中心,河北保定0710012.河北农业大学园艺学院,河北省梨工程技术研究中心,河北保定071001;英国利物浦约翰摩尔大学,药学和分子生物学学院,英国利物浦L33AF
摘要：[目的]探寻一种由农杆菌介导的杜梨叶片瞬时转化的最佳方法.[方法]以杜梨组织培养的幼嫩叶片为材料,将含有GUS基因的pBI121植物表达载体转化农杆菌GV3101和EHA105,设计3因子3水平正交试验L9(33),采用不同农杆菌菌液浓度、不同真空渗入时间,侵染叶片组织细胞,取不同时间共培养后的叶片观察GUS染色情况.[结果]GV3101和EHA105均能高效侵染转化杜梨叶片,使GUS蛋白表达,但其转化效率不同.农杆菌GV3101在菌液OD600为0.8,真空渗入20 min,共培养4d后,杜梨叶片的转化效率即可达到100％,且叶片坏死率仅为13.09％;EHA105在OD600为0.8,真空渗入30 min,共培养6d,或菌液OD600为1.0,真空渗入10 min,共培养2d的条件下转化效率最高,均为83.33％,但是,叶片坏死率分别为27.78％和15.26％,然而在菌液OD600为1.0,真空侵染时间20 min,共培养4d后,叶片转化效率为75.79％,但叶片坏死率大大降低,仅为5.00％.[结论]菌株GV3101和EHA105均能高效侵染转化杜梨叶片,最高转化效率分别为100％和83.33％,所以菌株GV3101转化效率高于EHA105.考虑到叶片坏死率,菌株GV3101瞬时转化杜梨叶片的最适条件为:菌液OD600为0.8,真空渗入时间20 min,共培养4d,转化效率100％,叶片坏死率13.09％;菌株EHA 105瞬时转化杜梨叶片的最适条件为:菌液OD600为1.0,真空渗入20 min,共培养4d,转化效率75.79％,叶片坏死率5.00％.
关键词：杜梨组织培养叶片农杆菌瞬时转化β-葡糖醛酸酶
分类号：S661.2(果树园艺)
资助基金：现代农业产业技术体系(CARS-28-9)河北省研究生创新资助项目(CXZZBS2018116)
论文发表日期：2021-11-28
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 2006-2013 )
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