柑橘褪绿矮缩病毒dot-ELISA检测方法的建立及应用
秦阳阳1
陈香玲2
王甲军1
叶肖1
申世凯1
周彦1
1.西南大学柑桔研究所国家柑桔工程技术研究中心,重庆 4007122.广西农业科学院园艺研究所,南宁 530007
摘要：[目的]柑橘褪绿矮缩病毒(Citrus chlorotic dwarf-associated virus,CCDaV)是一种新的柑橘病毒,为给我国柑橘脱毒苗木质量控制和田间监测提供技术支撑,建立了一种灵敏度高、特异性强的快速检测方法.[方法]通过序列分析和相似性比对,明确抗原靶标;构建CCDaV-CP的原核表达载体,诱导目的蛋白表达后作为抗原用于注射兔子,制备抗血清.运用Western blot检测效价.通过优化抗体浓度,建立CCDaV的dot-ELISA检测方法,明确其灵敏度,并用于田间疑似样品检测.[结果]以外壳蛋白(CP)的保守区域为靶标,成功构建了表达载体pET28a-CCDaV-CP,其在18℃,IPTG浓度0.5 mmol·L-1时,诱导12 h,目的蛋白的表达量高.制备的特异性抗血清效价为1:3000.由此建立的dot-ELISA检测方法在提取液被稀释640倍时,仍能检测出CCDaV.应用该方法对42份田间疑似样品的检测结果与PCR法的符合率为94.73％.[结论]首次获得了CCDaV的抗血清,并以此建立了快捷、灵敏、准确的dot-ELISA检测方法,为CCDaV的快速检测和防控提供了技术支撑.
关键词：柑橘褪绿矮缩病毒外壳蛋白抗血清斑点酶联免疫吸附法
分类号：S666(果树园艺)
资助基金：国家重点研发计划(2019YFD1001802)现代农业产业技术体系(CARS-26-05B)重庆市自然科学基金(cstc2019jcyj-msxmX0557)
论文发表日期：2022-11-28
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 2181-2187 )
英文信息