柑橘衰退病毒RT-RPA-LFD可视化检测方法的建立及应用
申世凯1
曾婷1
乔兴华2
陈力2
任杰群3
周彦1
1.西南大学柑桔研究所国家柑桔工程技术研究中心,重庆 4007122.重庆市万州区植物保护与果树技术推广站,重庆 4007123.重庆三峡农业科学院,重庆 400712
摘要：[目的]柑橘衰退病由柑橘衰退病毒(citrus tristeza virus,CTV)引起,是一种世界性的重要柑橘病害.为实现CTV的田间快速检测,建立一种准确、快速且可视化的检测方法.[方法]以CTV外壳蛋白(CP)的保守区域为靶标,设计3对特异性引物和探针,通过引物筛选,以及优化引物浓度、反应时间和反应温度等条件,建立CTV的反转录-重组酶聚合酶扩增-侧流层析试纸条(RT-RPA-LFD)快速检测方法,明确其灵敏度,并用于田间疑似样品的检测.[结果]建立了CTV的RT-RPA-LFD检测方法:最佳检测引物为RPA-1F/R,对应探针为RPA-P,最佳反应条件为40℃,25 min,且与其他5种柑橘病毒无交叉反应.该方法的灵敏度是RT-PCR的100倍,最低可检测到2.12×101 拷贝·μL-1的CTV核酸,与RT-qPCR相当.采用RT-RPA-LFD法在67份田间样品中检测出CTV阳性样品41份,与RT-PCR法检测结果一致.[结论]建立的CTV RT-RPA-LFD法具有操作简单、快速、结果可视等优点,适合基层植保工作者对田间样品开展快速检测.
关键词：柑橘柑橘衰退病毒反转录-重组酶聚合酶扩增-侧流层析试纸条快速检测
分类号：S666(果树园艺)
资助基金：现代农业产业技术体系(CARS-26-05B)
论文发表日期：2023-12-28
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：9( 2652-2660 )
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