平邑甜茶发根农杆菌介导转化体系构建与优化
周雪婷
武凯凯
崔蓝芳
张坤玺
白团辉
史江莉
焦健
王苗苗
刘昱
赵玉洁
万然
郝鹏博
郑先波
河南农业大学园艺学院,郑州 450046;河南省园艺植物生物学国际联合实验室,郑州 450046
摘要：[目的]建立并优化平邑甜茶(Malus hupehensis Rehd.)幼苗简单、高效、快速的发根农杆菌转化体系.[方法]以不同苗龄的平邑甜茶幼苗为材料,使用携带GFP及GUS过表达质粒的发根农杆菌K599,通过注射法、活化菌液浸染及菌株涂抹方法侵染平邑甜茶根颈部诱导毛状根,利用GFP荧光检测、GFP蛋白印迹检测、DNA检测和GUS染色方法进行转基因株系验证,同时对成功转化株系根、茎、叶组织的表达量进行分析,检测发根农杆菌在转化平邑甜茶株系中的迁移性.[结果]不同苗龄平邑甜茶幼苗诱导毛状根能力具有较大差异,其中三叶龄幼苗诱导毛状根率最高,为96％,五叶龄幼苗最高的毛状根诱导率为65％,以使用菌株涂抹方式转化植株的毛状根分布为最佳、毛状根诱导率为最高.发根农杆菌在成功转化株系中存在随机向地上部迁移的现象,并能够整合目的基因至叶片叶柄及部分主叶脉基因组中,但在培养30 d时无法通过蛋白印迹方式在蛋白水平上检测到蛋白信号.[结论]建立并优化了简单、高效的发根农杆菌介导的平邑甜茶转化体系,鉴定了发根农杆菌在转化株系中随机向地上部迁移规律,为发根农杆菌技术的进一步利用提供理论依据.
关键词：平邑甜茶发根农杆菌转化效率迁移性
分类号：S661.1(果树园艺)
资助基金：河南省现代农业产业技术体系(HARS-22-09-Z2)
论文发表日期：2024-05-28
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：10( 999-1008 )
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