模块化高效CRISPR载体组装与苹果基因编辑效率评价体系构建
侯飞帆1
黄传秘1
郝鹏博1
丛柳1
白团辉1
史江莉1
王苗苗1
刘昱1
赵玉洁1
万然1
申亚文1
张恒涛2
张坤玺1
郑先波1
焦健1
1.河南农业大学园艺学院,郑州 450046;河南省苹果种质创新与利用工程研究中心,郑州 4500462.中国农业科学院郑州果树研究所,郑州 450009
摘要：[目的]CRISPR/Cas基因编辑技术在苹果等果树遗传改良中展现了广阔的应用前景,然而现有的基因编辑系统在载体组装效率和模块化设计等方面仍存在局限性.旨在构建一个模块化高效的CRISPR载体系统,并建立与之配套的苹果基因编辑效率评价体系.[方法]利用常规载体进行改造,通过Golden Gate克隆技术构建了模块化CRISPR载体组装平台,实现了 Cas蛋白、启动子及sgRNA表达盒等核心元件的灵活替换和快速构建.同时,整合RUBY报告元件,建立了精准的质粒转染可视化检测系统.[结果]该系统成功实现CRISPR/Cas元件与报告基因元件的协同组装;利用苹果瞬时转化体系,对苹果PDS基因的gRNA的编辑效率进行初步评估,发现不同的gRNA的基因编辑效率存在差异,有必要在稳定遗传转化开展之前对gRNA的编辑效率进行初步评价.[结论]研究结果为后续苹果基因编辑系统的优化提供了主要的载体骨架,并为其他果树基因编辑工具的进一步优化奠定了基础.
关键词：苹果CRISPR/Cas系统模块化载体基因编辑效率瞬时转化
分类号：S661.1(果树园艺)
资助基金：河南省重大科技专项(221100110400)河南省中央引导地方科技发展资金项目(Z20241471014)河南省现代农业产业技术体系(HARS-22-09-G3)河南省重点研发专项(251111112900)
论文发表日期：2025-08-10
在线出版日期：2025-09-04（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：12( 1871-1882 )
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