猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体间接ELISA检测方法的建立
李群
范娟
魏荣荣
叶正琴
丁国伟
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摘要：猪感染猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus,PRRSV)14 d后就可以产生针对非结构蛋白(Non-Structural Protein 7,Nsp7)的抗体,而且抗体水平很高,与N蛋白抗体水平相似,但比N蛋白抗体持续时间更长.另外,检测Nsp7抗体可用于区分PRRSV I型和II型的感染.本试验旨在建立一种快速、特异且敏感的检测血清中PRRSV抗体的方法.试验根据NCBI数据库录入的Nsp7蛋白序列(GenBank:EF536003)设计引物,利用聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)扩增Nsp7基因,构建原核表达载体pET28a-Nsp7,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,并诱导重组蛋白表达.利用亲和层析纯化重组蛋白,Western Blot鉴定表达产物.将纯化后的重组蛋白按不同浓度包被酶标板,通过方阵滴定法确定最佳抗原包被浓度及血清稀释度,并对其条件进行优化,最终建立检测PRRSV Nsp7抗体的间接酶联免疫吸附测定(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)方法.结果表明,试验表达了重组Nsp7蛋白,重组的Nsp7蛋白能与PRRSV阳性血清发生特异性反应,建立了一种基于重组Nsp7蛋白的间接ELISA检测方法.建立的间接ELISA检测方法分别与商品化PRRSV抗体检测试剂盒检测结果相比,两者符合率为87.74％.试验表明,建立的间接ELISA方法可以用于PRRSV抗体的检测.
关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp7基因原核表达间接酶联免疫吸附测定
分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)
论文发表日期：2019-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 12-18 )