小鼠Calb2基因重组腺病毒载体的构建与鉴定
王菁
罗建
刘珊
代晓南
高莉
高超
刘嘉茵
崔毓桂
1.210029,南京医科大学第一附属医院生殖医学中心2.210029,南京医科大学第一附属医院生殖医学中心3.210029,南京医科大学第一附属医院生殖医学中心4.210029,南京医科大学第一附属医院生殖医学中心5.210029,南京医科大学第一附属医院生殖医学中心6.210029,南京医科大学第一附属医院生殖医学中心7.210029,南京医科大学第一附属医院生殖医学中心8.210029,南京医科大学第一附属医院生殖医学中心
摘要：目的:为了体外研究Calretinin(Calb2)基因在生殖系统、神经系统、视觉传导中的作用,构建小鼠Calb2基因表达重组腺病毒载体.方法:用反转录聚合酶链反应( RT-PCR)方法,以小鼠Calb2 cDNA为模板,扩增Calb2基因.亚克隆后,将Calb2基因片段克隆至腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV上,构建穿梭质粒pAdTrack-Calb2.将穿梭质粒pAdtrack-Calb2转化至BJ-5183感受态细菌中,与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1同源重组,获得重组质粒AdCMV-Calb2.重组质粒AdCMV-Calb2转染AD-293细胞,进行病毒包装和扩增,通过绿色荧光蛋白(GFP)报告基因观察重组病毒的产生.同时,构建对照腺病毒载体AdCMV-GFP.用获得的重组腺病毒感染AD-293细胞,通过观察GFP检测感染效率、蛋白质印迹方法检测Calb2基因的表达.结果:测序和酶切鉴定重组腺病毒质粒构建正确;经AD-293细胞包装后可观察到GFP表达;获得的重组腺病毒载体体外感染AD-293细胞,观察到GFP表达;经蛋白质印迹方法检测,与未感染腺病毒载体组(Mock)和感染对照腺病毒载体组(AdCMV)相比,Calb2基因腺病毒载体(AdCMV-Calb2)感染组CALB2蛋白水平显著增高(P＜0.05).结论:成功构建了小鼠Calb2基因重组腺病毒载体,并在AD-293细胞超表达,为课题组研究Calb2基因在生殖相关疾病的生理与病理生理作用奠定了基础.
关键词：Calb2基因腺病毒科遗传载体泌尿生殖系统
资助基金：国家自然科学基金(81170559)
论文发表日期：2012-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 261-264,327 )
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