小鼠Tox3基因重组慢病毒载体的构建及其在卵巢颗粒细胞中的表达
崔玉倩
赵涵
马增香
赵世斗
徐海静
王文婷
郭海鹏
陈子江
1.200127,上海交通大学医学院附属仁济医院生殖医学中心2.200127,上海交通大学医学院附属仁济医院生殖医学中心3.200127,上海交通大学医学院附属仁济医院生殖医学中心4.200127,上海交通大学医学院附属仁济医院生殖医学中心5.200127,上海交通大学医学院附属仁济医院生殖医学中心6.200127,上海交通大学医学院附属仁济医院生殖医学中心7.200127,上海交通大学医学院附属仁济医院生殖医学中心8.200127,上海交通大学医学院附属仁济医院生殖医学中心
摘要：目的:构建重组慢病毒载体pCDH-Tox3-Flag,并检测其转染小鼠原代卵泡颗粒细胞后的表达情况.方法:利用DNA重组技术将小鼠Tox3基因克隆入慢病毒表达载体pCDH-MCS-T2A-copGFP-MSCV中,通过酶切、测序验证后,将重组慢病毒载体pCDH-Tox3-Flag、包装质粒psPAX2和包膜质粒pMD2.G共转染HEK293FT细胞,包装重组慢病毒LV-Tox3-Flag,并感染小鼠原代颗粒细胞,用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Tox3 mRNA的转录水平,蛋白质印迹(Western blot)法检测TOX3-Flag蛋白的表达情况.结果:经酶切及测序结果证实,构建了重组慢病毒载体LV-Tox3;RT-PCR及Western blot结果显示慢病毒感染小鼠原代颗粒细胞后,Tox3基因能在细胞内正确转录、翻译并稳定表达TOX3蛋白.结论:成功建立Tox3基因慢病毒表达载体L V-Tox3-Flag,包装的慢病毒能够成功感染小鼠原代颗粒细胞,并使Tox3基因得到稳定表达,为后续研究Tox3基因在生殖相关疾病的生理与病理作用奠定了基础.
关键词：Tox3慢病毒载体粒层细胞小鼠
资助基金：国家自然科学基金(81300459)中国博士后科学基金(2012M520909)
论文发表日期：2014-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 95-98,封3 )
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