Rspo1-EGFP重组腺相关病毒载体的构建
杜淑敏
曹以诚
李新建
1.华南理工大学生物科学与工程学院,广州,5100062.华南理工大学生物科学与工程学院,广州,5100063.华南理工大学生物科学与工程学院,广州,510006
摘要：本文通过构建携带Rspo1-EGFP融合基因的重组腺相关病毒载体,包装出含有目标基因的重组腺相关病毒.首先利用PCR从cDNA文库中把Rspo1基因扩增出来,插入到pcDNA6-EGFP中EGFP的上游形成融合基因Rspo1-EGFP.采用AAV Helper-free包装系统,将融合基因用PCR方法从质粒pcDNA6-Rspo1-EGFP上扩增出来,亚克隆到AAV表达质粒pAAV-MCS多克隆位点中,构建出重组质粒pAAV-Rspo1-EGFP.重组质粒与包装质粒pAAV-RC和辅助质粒pHelper磷酸钙法共转染AAV-293细胞制备重组病毒rAAV-Rspo1-EGFP.重组病毒感染AAV-HT1080细胞,荧光显微镜检测病毒介导的目标基因表达,流式细胞技术测定病毒滴度.结果:酶切鉴定和测序确定重组病毒载体pAAV-Rspo1-EGFP构建成功.病毒感染的细胞中检测到绿色荧光,表明重组病毒包装成功并介导融合基因在宿主细胞里表达,病毒滴度达107VP/mL.本研究成功包装出具有侵染性的重组朦相关病毒agV-Rspo1-EGFP,为今后利用腺相关病毒载体进行Rspo1相关的体内体外研究提供了实验基础.
关键词：R-spondin1增强型绿色荧光蛋白腺相关病毒流式细胞技术
分类号：TS201.2(食品工业)
资助基金：国家自然科学基金(90412015)国家科技基础条件平台建设计划(200GDKA64001)
论文发表日期：2009-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 993-997 )
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