共表达透明颤菌血红蛋白提高脂肪酶在毕赤酵母中的表达
卢俊裕
林影
梁书利
叶燕锐
1.华南理工大学生物科学与工程学院,广东广州5100062.华南理工大学生物科学与工程学院,广东广州5100063.华南理工大学生物科学与工程学院,广东广州5100064.华南理工大学生物科学与工程学院,广东广州510006
摘要：为了克服巴斯德毕赤酵母高密度发酵过程中的溶氧限制,提高外源蛋白的表达量,本文以启动子YPT介导透明颤菌血红蛋白(VHb)在培养过程中组成型表达.同时以启动子AOX1介导的南极假丝酵母脂肪酶B(CALB)基因作为报告基因,使CALB在甲醇诱导阶段表达.另外,还将绿色荧光蛋白在过氧化物表面表达,将红色荧光蛋白在过氧化物基质中表达以检测信号肽能否定位在相应的位置.最后,将VHb分别在过氧化物酶体表面和基质两个位置表达,以观察表达位置的不同所产生的影响.通过SDS-PAGE和Western Blot分析表明,CALB和VHb在重组菌中成功实现了共表达.在限氧条件下,重组菌株GS 115/ExVHb、GS115/VHbSKL的外源蛋白CALB的表达量比对照菌株GS 115/CALB分别提高了27.57％和20.52％.这说明VHb与外源基因共表达可以改善酵母在发酵过程中的摄氧情况,提高外源蛋白的表达量.
关键词：透明颤菌血红蛋白脂肪酶氧限制毕赤酵母分泌表达
论文发表日期：2014-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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