编码米曲霉果糖基转移酶基因在大肠杆菌中的重组表达
王玉海
岳娟
王鹏
林晓珊
张毅
1.华南理工大学生物科学与工程学院,广东广州5100062.华南理工大学生物科学与工程学院,广东广州5100063.华南理工大学生物科学与工程学院,广东广州5100064.华南理工大学生物科学与工程学院,广东广州5100065.华南理工大学生物科学与工程学院,广东广州510006
摘要：为了大量获得果糖基转移酶,本文通过RT-PCR扩增获得米曲霉果糖基转移酶基因,连接到大肠杆菌pEASY-E1质粒上,并转化到大肠杆菌BL21-DE3菌株中成功表达,通过对重组菌诱导表达条件的优化,最终确定在诱导温度为25℃,诱导剂异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)浓度为1.0 μmol/mL的条件下,该重组酶可以顺利表达.利用重组质粒PEASY-S1上的6×组氨酸标签,用亲和层析的方法纯化能够得到较高纯度的果糖基转移酶.以蔗糖为底物,用该酶进行果糖基转化生产低聚果糖的实验结果表明:重组果糖基转移酶具有一定催化能力,其酶活力达到59.0 U/g,且在低温诱导时稳定表达,具备一定的潜在开发利用价值.本实验成功在大肠杆菌中重组表达出果糖基转移酶,并且能够短时间内、大量表达具有催化活性的果糖基转移酶,可望为果糖基转移酶的工业化提供理论基础.
关键词：蔗果寡糖果糖基转移酶大肠杆菌蛋白表达
论文发表日期：2014-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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