Mincle受体蛋白克隆、原核表达与纯化
严萍1
朱喜梅1
李璐1
林文华1
詹若挺1
唐语谦2
1.广州中医药大学中药资源科学与工程研究中心,教育部岭南中药资源重点实验室,广东广州5100062.华南理工大学轻工与食品学院,广东广州,510640
摘要：本研究通过应用基因工程技术,构建融合基因pET14b-Mincle的原核表达载体,并将其转化到大肠杆菌BL21 (DE3)中诱导表达目的蛋白Mincle,并对其表达产物进行纯化、鉴定、透析复性.采用RT-PCR技术扩增小鼠Mincle的基因片段,将其克隆于载体pMD 18-T中,并克隆到带有His-tag的原核表达载体pET 14b中;重组质粒经酶切鉴定、序列比对验证正确后转化大肠杆菌BL21(DE3)中经IPTG诱导表达目的蛋白.经1mmol/L IPTG在37℃下诱导5h获得了分子量约为22 kDa的重组融合蛋白的优化表达,SDS-PAGE、Western Blot和ELISA证实了重组蛋白的特异性.Mincle以包涵体形式在宿主中表达,利用Ni2+亲和柱进行纯化和生物膜透析复性,纯化和透析后的蛋白经Western Blot、ELISA法定性鉴别以及用白色念珠菌(SC5314)整个灭活细胞对复性后蛋白的活性测定,透析后的Mincle重组融合蛋白能与白色念珠菌的特异性结合体现其生物活性,表明获得了具有活性的蛋白,为后续研究打下基础.
关键词：Mincle受体蛋白基因克隆表达纯化
资助基金：高等学校博士学科点专项科研基金(20114425120010)国家自然科学基金(31201330)广州市科技攻关计划(201300000202)
论文发表日期：2015-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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