副溶血性弧菌vanM基因原核表达及酰基高丝氨酸内酯信号分子鉴定研究
吴葵1
吴清平2
张菊梅2
徐晓可2
1.中国科学院南海海洋研究所,广东广州510301;广东省微生物研究所,省部共建华南应用微生物国家重点实验室,广东省菌种保藏与应用重点实验室,广东广州510070;中国科学院大学,北京1000492.广东省微生物研究所,省部共建华南应用微生物国家重点实验室,广东省菌种保藏与应用重点实验室,广东广州510070
摘要：从副溶血性弧菌ATCC33847扩增vanM基因,连接到pMD 19-T载体进行克隆测序和序列比对;将测序正确的vanM序列经NdeI和EcoRI酶切后连接到pET22b;以IPTG诱导vanM基因在BL21(DE3)中表达;利用acyl-HSL报告菌株KYC55检测ATCC33847和带有vanM基因的大肠杆菌的acyl-HSL活性;萃取VanM合成的acyl-HSL信号分子,经HPLC-MS测试后与标准品进行对比分析.成功测序了ATCC33847 vanM基因,与鳗弧菌vanM基因序列相似性达到57％;并构建了pET22b-vanM表达质粒,以0.6 mmol/L IPTG诱导BL21 (DE3)表达系统时VanM融合蛋白表达量最大;经过KYC55检测ATCC33847和带有pET22b-vanM的大肠杆菌能够产生acyl-HSL活性;HPLC-MS分析显示,ATCC33847和携带pET22b-vanM的BL21(DE3)萃取物中含有3-Hydroxybutanoyl-HSL (3-OH-C4-HSL)和3-Hydroxydecanoyl-HSL (3-OH-C10-HSL)信号分子.本研究克隆表达了副溶血性弧菌vanM,首次证明了副溶血性弧菌利用VanM信号分子合成酶合成acyl-HSL信号分子3-OH-C4-HSL和3-OH-C10-HSL.
关键词：副溶血性弧菌vanM原核表达酰基高丝氨酸内酯
资助基金：广东省自然科学基金研究团队项目(S2012030006235)广州市科技计划(201300000074)
论文发表日期：2015-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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