类芽孢杆菌碱性果胶裂解酶Pel在毕赤酵母中的高效表达
刘晓肖
郑学云
梁书利
韩双艳
林影
1.华南理工大学生物科学与工程学院,广东广州,5100062.华南理工大学生物科学与工程学院,广东广州,5100063.华南理工大学生物科学与工程学院,广东广州,5100064.华南理工大学生物科学与工程学院,广东广州,5100065.华南理工大学生物科学与工程学院,广东广州,510006
摘要：本研究全基因合成了来源于类芽孢杆菌的碱性果胶酶基因pel,克隆至pHKA载体上,成功实现其在毕赤酵母GS115中的分泌表达;并对信号肽和启动子进行优化,使得摇瓶发酵诱导168 h果胶裂解酶酶活达到432.36 U/mL.初步测定了果胶裂解酶Pel的基本酶学性质,其最适反应温度和pH分别为60℃、10.0;在50℃下处理300 min裂解酶活力保留90％以上,而在60℃下处理210 min,酶活力剩余约50％;在pH 9～12的50mM各缓冲液中处理酶液16h,酶活力仍然保留90％以上,该酶耐碱性强,但在偏酸性缓冲液中处理该酶,酶活力有所下降;同时研究了二价金属离子对果胶裂解酶活性力的影响,Ca2+对Pel发挥裂解作用是必需的,Fe2+、Mg2+、Ni2+对Pel均有激活作用,而金属离子螯合物EDTA的存在则使酶活力完全丧失;该酶在碱性条件下较好的稳定性决定了其潜在的工业应用前景.
关键词：毕赤酵母果胶裂解酶异源表达启动子信号肽
资助基金：国家自然科学基金(31470159)国家自然科学基金(31400062)
论文发表日期：2015-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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