嘌呤核苷磷酸化酶不同表达方式对发酵利巴韦林的影响
刘莉1
李燕军2
谢希贤3
陈宁
1.天津科技大学生物工程学院,天津,3004572.天津市氨基酸高效绿色制造工程实验室,天津,3004573.代谢控制发酵技术国家地方联合工程实验室,天津,300457
摘要：嘌呤核苷磷酸化酶(PNPase,由pupG基因编码)是合成利巴韦林的关键酶,本研究考察该酶的质粒过表达和基因组整合表达对鸟苷生产菌解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)TA208发酵生产利巴韦林的影响.以B.amyloliquefaciens TA208为出发菌株,分别利用基因过表达和无标记整合技术,成功构建了B.amyloliquefaciens TA2081和TA2082.通过实时定量PCR测定这3株菌pupG基因的转录水平,结果表明与B.amyloliquefaciens TA208相比,TA2081和TA2082的转录水平均有提高,但TA2081提高的更为显著;通过测定PNPase活性发现,B.amyloliquefaciens TA2081和TA2082的PNPase活力分别为出发菌株TA208的2倍和1.30倍.7.5 L分批补科发酵实验表明,与出发菌B.amyloliquefaciens TA208相比,工程菌TA2081鸟苷到利巴韦林的摩尔转化率从20.41％提高到98.63％,TA2082的转化率从20.41％提高到40.95％.综上所述,增加pupG的表达量能提高利巴韦林的产量,本研究为利巴韦林生产菌的代谢工程改造提供了理论依据和技术指导.
关键词：解淀粉芽孢杆菌利巴韦林嘌呤核苷磷酸化酶质粒过表达基因组整合表达
资助基金：国家自然科学基金(31100054)天津市教委项目(20140603)
论文发表日期：2015-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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