cA-GFP融合蛋白在大肠杆菌中的高效功能性表达
苏艳芳
杨晶
王蒙
吴少敏
马毅
李杉
王菊芳
1.华南理工大学生物科学与工程学院,广东广州,5100062.华南理工大学生物科学与工程学院,广东广州,5100063.华南理工大学生物科学与工程学院,广东广州,5100064.华南理工大学生物科学与工程学院,广东广州,5100065.华南理工大学生物科学与工程学院,广东广州,5100066.华南理工大学生物科学与工程学院,广东广州,5100067.华南理工大学生物科学与工程学院,广东广州,510006
摘要：为了实现乳酸乳球菌锚定蛋白cA在大肠杆菌中可溶表达以及直观检测其生物学活性,以乳酸乳球菌MG1363为模板,扩增N-乙酰葡萄糖胺糖苷酶AcmA基因,将其C末端序列与GFP基因融合,连接至大肠杆菌表达载体pET28a,构建重组质粒pET28a-cA-GFP,转化至大肠杆菌表达菌株BL21(DE3),通过低温诱导表达重组蛋白cA-GFP.工程菌超声破碎后的上清液与经热酸处理的乳酸乳球菌常温孵育,经SDS-PAGE和荧光显微镜检测.结果表明,工程菌可以表达分子量约53 ku的目的融合蛋白质,与预期大小相符.cA-GFP通过锚定蛋白cA的引导回向锚定,成功将GFP展示在乳酸乳球菌表面,目的蛋白cA-GFP在乳酸乳球菌表面展示量为121 mg/g干重菌体.GFP锚定至乳酸乳球菌后于4℃保存,连续6d测定其荧光强度,荧光强度仍可达82.2％,证明其稳定性较好.成功获得了具有生物学功能的cA-GFP可溶性蛋白,为进一步展示功能性外源蛋白奠定了坚实的基础.
关键词：乳酸乳球菌锚定蛋白绿色荧光蛋白回向锚定
资助基金：国家自然科学基金(21306055)高等学校博士学科点专项科研基金(20130172120041)广东省自然科学基金(2014A030313261)
论文发表日期：2015-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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