重组类人Ⅰ型胶原蛋白肽在大肠杆菌中的表达纯化及功能鉴定
杨晶
余洁莹
王蒙
吴少敏
马毅
王菊芳
摘要：本研究构建了编码重组类人Ⅰ型胶原蛋白肽基因的原核表达载体pET28a-rhC I,并将其转化到大肠杆菌Rosetta (DE3)中进行诱导表达.采用PCR的方法扩增重组类人Ⅰ型胶原蛋白肽的cDNA序列,并将其克隆到原核表达载体pET28a上;重组质粒转化到大肠杆菌Rosetta (DE3)中进行IPTG诱导表达,并优化表达条件.利用SDS-PAGE和Western Blot检测表达产物.大量表达重组蛋白,采用镍亲和层析进行纯化,并对纯化后的蛋白进行体外抗氧化研究以及促细胞增殖分析.结果表明,通过大肠杆菌Rosetta (DE3)诱导表达获得了分子量约为40 ku的重组蛋白,与预期相符.经镍亲和层析获得纯度较高的蛋白,通过DPPH实验证明其有一定的抗氧化活性;而且MTT实验证实该蛋白可以促进小鼠成纤维细胞3T3细胞的增殖,为其在食品、化妆品和医疗行业的应用提供一定的理论依据.
关键词：胶原蛋白重组表达抗氧化细胞增殖
论文发表日期：2016-01-01
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