增强磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶活性对谷氨酸棒状杆菌积累α-酮戊二酸的影响
孙兰超
刘涛
赵岩
谢希贤
徐庆阳
张成林
陈宁
1.代谢控制发酵技术国家地方联合工程实验室,天津市氨基酸高效绿色制造工程实验室,天津科技大学生物工程学院,天津3004572.代谢控制发酵技术国家地方联合工程实验室,天津市氨基酸高效绿色制造工程实验室,天津科技大学生物工程学院,天津3004573.代谢控制发酵技术国家地方联合工程实验室,天津市氨基酸高效绿色制造工程实验室,天津科技大学生物工程学院,天津3004574.代谢控制发酵技术国家地方联合工程实验室,天津市氨基酸高效绿色制造工程实验室,天津科技大学生物工程学院,天津3004575.代谢控制发酵技术国家地方联合工程实验室,天津市氨基酸高效绿色制造工程实验室,天津科技大学生物工程学院,天津3004576.代谢控制发酵技术国家地方联合工程实验室,天津市氨基酸高效绿色制造工程实验室,天津科技大学生物工程学院,天津3004577.代谢控制发酵技术国家地方联合工程实验室,天津市氨基酸高效绿色制造工程实验室,天津科技大学生物工程学院,天津300457
摘要：磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶是谷氨酸棒杆菌中催化合成TCA循环中重要代谢物草酰乙酸的关键酶,本文以谷氨酸棒状杆菌GDK-10为出发菌株,通过同源重组技术对磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶编码基因pepc进行以下改造:将GDK-10的Ppece启动子替换为强启动子Ptuf,获得菌株GDK-11;构建pepc双拷贝菌株GDK-12;对GDK-10基因组pepc进行定点突变(N917G),获得菌株GDK-13.实时荧光定量PCR检测表明,菌株GDK-11和GDK-12的pepc表达量是GDK-10的47.05倍和2.03倍.发酵结果表明,菌株GDK-11和GDK-12的产酸量相对于出发菌株分别下降45.50％和13.90％,但GDK-12的单位菌体产量较GDK-10提高38.59％.菌株GDK-13产酸量无明显变化,但其单位菌体产量和糖酸转化率分别提高21.14％和8.97％.可见,适量过量表达pepc和将GDK-10基因组pepc替换为解除天冬氨酸反馈抑制的pepc (N917G)均可提高α-KG的单位菌体产量且后者可显著提高糖酸转化率.本研究结果可对α-KG的基因工程改造奠定基础.
关键词：谷氨酸棒状杆菌α-酮戊二酸磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶同源重组
资助基金：天津市教委科研究计划项目(20120630)
论文发表日期：2016-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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