Ca2+结合位点对极端嗜热α-淀粉酶ApkA高温活性及热稳定性的影响
曾静
郭建军
顾斌涛
张莉莉
熊大维
袁林
1.江西省科学院,微生物研究所,江西南昌3300962.江西省科学院,微生物研究所,江西南昌3300963.江西省科学院,微生物研究所,江西南昌3300964.江西省科学院,微生物研究所,江西南昌3300965.江西省科学院,微生物研究所,江西南昌3300966.江西省科学院,微生物研究所,江西南昌330096
摘要：开发耐高温α-淀粉酶是目前淀粉液化工艺的迫切需要,极端嗜热α-淀粉酶具有优良的高温活性和热稳定性,其高温适应性机制研究可以为构建耐高温6c-淀粉酶提供理论依据和设计思路.通过分析来源于极端嗜热古生菌Thermococcus kodakarensis KOD1的α-淀粉酶ApkA的氨基酸序列,构建Ca2+结合位点突变体ApkAdsN110A/D155A/D164A.酶学性质分析表明,与野生型ApkAds相比,突变体ApkAdsN 110A/D155A/D 164A的高温活性和热稳定性明显降低.其中ApkAds的最适反应温度为90℃,对应的绝对酶活为2946.75 U/mg;突变体ApkAdsN110A/D155A/D164A的最适反应温度为8 0℃,对应的绝对酶活为917.07 U/mg. ApkAds于90℃的半衰期约为5h,突变体ApkAdsN 110A/D155A/D164A于90℃的半衰期约为2h.本研究结果表明ApkA中Ca2+结合位点与其高温活性和热稳定性均相关,Asn110、Asp 155及Asp164这三个氨基酸残基的丙氨酸替换突变不利于ApkA维持其高温活性和热稳定性.
关键词：极端嗜热α-淀粉酶Ca2+结合位点定点突变高温活性热稳定性
资助基金：国家自然科学基金(31501422)江西省青年科学基金(20151BAB214001)江西省科学院项目(2014-YYB-08)江西省科学院项目(2014-XTPH1-08)
论文发表日期：2016-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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