解淀粉芽孢杆菌单链核苷酸介导的同源重组系统的构建
廖瑜玲1
潘力2
王斌2
1.华南理工大学生物科学与工程学院,广东广州510006;广东肇庆星湖生物科技股份有限公司,广东肇庆5260402.华南理工大学生物科学与工程学院,广东广州,510006
摘要：解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)是一类重要的工业微生物,在农业、医药和食品等领域有广泛用途.为了开发高效的基因操作技术,在解淀粉芽孢杆菌中引入单链核苷酸(ssDNA)介导的同源重组方法.首先,通过敲除mutS基因干扰解淀粉芽孢杆菌的错配修复系统,然后导入单链结合蛋白(Beta)表达质粒,构建了宿主菌B.amyloliquefaciens XH7(mutS-,bet+).其次,通过设计88 bp的ssDNA电转化导入以上构建的宿主菌中实现了以rpoB基因为靶点的有效同源重组,转化株产生利福平抗性.实验优化了ssDNA介导同源重组的参数:75μg的ssDNA,电转细胞复苏时间为6～12h.本研究首次成功实现了ssDNA同源重组技术在解淀粉芽孢杆菌的应用,对解淀粉芽孢杆菌和其它难转化的芽孢杆菌属进行有效的遗传操作手段提供新的思路.
关键词：单链核苷酸同源重组解淀粉芽孢杆菌错配修复系统单链结合蛋白
资助基金：国家高技术研究发展计划（863计划）(2014AA021304)广东省自然科学基金(S2012030006235)广东省科技计划(2013B010404007)广州市科技计划(201510010191)广东省科技计划(2013B090800003)中央高校基本科研业务费专项(2015ZP032)中央高校基本科研业务费专项(2015ZZ040)
论文发表日期：2016-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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