一种Kappa-卡拉胶酶的克隆、表达及其酶学性质研究
李佳佳1
倪辉2
蔡慧农2
朱艳冰2
肖安风2
1.集美大学食品与生物工程学院,福建厦门,3610212.集美大学食品与生物工程学院,福建厦门361021;福建省食品微生物与酶工程重点实验室,福建省海洋功能食品工程技术研究中心,厦门市海洋功能食品重点实验室,福建厦门361021
摘要：将来源于Pseudoalteromonas carrageenovora ASY5菌株的κ-卡拉胶酶基因克隆到载体pET-28a上,并转化到大肠杆菌BL21(DE3)中表达.克隆得到的κ-卡拉胶酶基因序列全长1194 bp,编码一个由398个氨基酸残基组成的蛋白酶,该蛋白酶的分子量为48 ku,结构域分析表明该κ-卡拉酶符合GH16家族的特点.对重组κ-卡拉胶酶的酶学性质进行考察:重组κ-卡拉胶酶只能够专一性的降解κ-卡拉胶;该酶的最适温度和pH分别是55℃和pH 9.0,重组酶在40℃保温1h可保持95.0％的活性,在45℃保温1h残余酶活与对照比较仍保留60.0％,在pH 8.0～10.0的缓冲液中处理30 min,仍能保持80％以上的酶活力,低浓度的Na+和K+以及1mmol/L的Sn2+、Fe3+、EDTA、DTT、Tween-20、Tween-80和Triton X-100、β-mercaptoethanol、SDS、Urea对重组酶活具有显著的促进作用;而高浓度的Na+和K+以及1 mmol/L的Cd2+、Ba2+、Mg2+、Fe2+、Ca2+对重组酶活性有不同程度的抑制作用.
关键词：食鹿角菜假交替单胞菌κ-卡拉胶酶克隆表达酶学性质
资助基金：国家自然科学基金(31401632)福建省重大专项(2015NZ0001-1)厦门市科技计划(3502Z20120005)厦门南方海洋研究中心项目(13GZP004NF10)
论文发表日期：2016-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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