通过串联启动子实现纳豆激酶在枯草芽孢杆菌中的高效表达
葛春蕾
刘中美
崔文璟
周丽
郭军玲
胡云峰
周哲敏
1.江南大学生物工程学院,工业生物技术教育部重点实验室,江苏无锡2141222.江南大学生物工程学院,工业生物技术教育部重点实验室,江苏无锡2141223.江南大学生物工程学院,工业生物技术教育部重点实验室,江苏无锡2141224.江南大学生物工程学院,工业生物技术教育部重点实验室,江苏无锡2141225.江南大学生物工程学院,工业生物技术教育部重点实验室,江苏无锡2141226.江南大学生物工程学院,工业生物技术教育部重点实验室,江苏无锡2141227.江南大学生物工程学院,工业生物技术教育部重点实验室,江苏无锡214122
摘要：本研究通过串联启动子方式实现纳豆激酶在枯草芽孢杆菌WB800中的高效分泌表达.通过对几种现有报道的强启动子的比较并对其进行串联操作,确定生产纳豆激酶的最优启动子及纳豆激酶的最高产量.本研究首先在枯草芽孢杆菌WB800中成功构建五种含不同强启动子的重组质粒pSG101(PHpaⅡ),pSG102(PBcaprE),pSG103(Pluxs),pSG104(gsiB)和pSG105(PyxiE),实现纳豆激酶分泌表达,并对其纤溶活性进行测定.结果表明,启动子PHpaⅡ介导的纳豆激酶纤溶活性(110.80 FU/mL)明显优于其他四种启动子.通过对启动子HpaⅡ进行多次串联,成功构建质粒pSG106(HpaⅡ-P HpaⅡ),pSG107(PHpaⅡ-PHpdrPHpaⅡ)和pSG108(P HpaⅡ-P HpaⅡ-PHpaⅡ-PHpaⅡ).数据显示,菌株Bacillus subtilis WB800/pSG 107(HMrP HpaⅡ-P HpaⅡ)纳豆激酶产量最高为213.30 FU/mL,相比单个启动子P HpaⅡ,提高了92.51％.通过对五种强启动子的比较以及对其进行串联操作,成功实现纳豆激酶在枯草芽孢杆菌WB800的高效表达,纤溶活性最高为213.30 FU/mL,与现有相关报道相比有明显优势.
关键词：纳豆激酶串联启动子分泌表达枯草芽孢杆菌WB800
资助基金：国家自然科学基金(31400078)国家高技术研究发展计划（863计划）(2014AA021304)江苏省产学研联合创新资金前瞻性联合研究项目(BY2014023-21)
论文发表日期：2016-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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