Thermoanaerobacter sp. X514嗜热脂肪酶LipTX的异源表达与酶学性质研究
魏涛
杨昆鹏
郏未未
毛多斌
1.郑州轻工业学院食品与生物工程学院,河南郑州,4500022.郑州轻工业学院食品与生物工程学院,河南郑州,4500023.郑州轻工业学院食品与生物工程学院,河南郑州,4500024.郑州轻工业学院食品与生物工程学院,河南郑州,450002
摘要：本文克隆表达了来源于嗜热细菌Thermoanaerobacter sp.X514的嗜热脂肪酶LipTX基因(Teth514_0029),利用亲和层析纯化了脂肪酶LipTX,并详细研究了该脂肪酶的酶学性质.采用PCR技术扩增脂肪酶LipTX基因,克隆到载体pET15b中,构建重组载体pET15b-LipTX;将重组载体转入大肠杆菌BL21(DE3)中并利用IPTG诱导表达目的蛋白,经70℃热处理和Ni-NTA亲和层析两步纯化,得到纯化的重组酶.SDS-PAGE结果表明,脂肪酶LipTX分子量为28 ku.酶学性质研究表明,该酶最适反应温度和pH分别为70℃和7.5;通过水解底物特异性和动力学实验,发现LipTX可以水解不同长链酰基(C8-C12)的对硝基苯酚酯底物,对硝基苯酚癸酸酯是该酶最适合底物;同时该酶能够水解链长在C4到C16范围的三甘油酯底物,其中以甘油三丁酸酯为底物的酶活力最高.该酶对非极性有机溶剂(甲醇、乙醇、丙酮、DMF、DMSO和正己烷和氯仿)和变性剂(SDS、Tween-20和TritonX-100)具有较强的抗性,因此在生物催化和有机化学合成中具有广阔的开发应用前景.
关键词：嗜热酶脂肪酶克隆表达酶学性质
资助基金：国家自然科学基金(21406210)河南省科技创新杰出人才项目(144200510011)
论文发表日期：2016-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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