雅致放射毛霉羧肽酶Y的基因克隆、表达与酶学性质研究
纪海兵
刘中美
郭军玲
周哲敏
1.江南大学生物工程学院,江苏无锡,2141222.江南大学生物工程学院,江苏无锡,2141223.江南大学生物工程学院,江苏无锡,2141224.江南大学生物工程学院,江苏无锡,214122
摘要：本研究从雅致放射毛霉中克隆、表达和纯化羧肽酶Y(CPY),体外激活后检测其酶学性质.本文筛选并鉴定了一株腐乳发酵菌株,命名为雅致放射毛霉PEP001(Actinomucor elegans PEP001).以相近种族来源的真菌羧肽酶Y保守序列设计简并引物调取部分目的基因序列,利用末端扩增技术(RACE)分别获得3'与5'端基因全长,克隆获得羧肽酶Y基因,全长为1557bp,编码518aa.将其酶原(proCPY)在大肠杆菌Rosetta中重组表达,产物为包涵体;在毕赤酵母GS115中成功分泌表达proCPY,产量为151.20±10.20mg/L.通过体外激活与纯化,获得电泳纯的成熟羧肽酶Y.成熟羧肽酶Y最适pH为6.0,最适温度为45℃,在40℃下有较高稳定性,在60℃下很快失活,在pH 4.0～7.0下都有较高的稳定性.本文中雅致放射毛霉PEP001羧肽酶Y为首次报道,为进一步研究其应用打下一定基础.
关键词：雅致放射毛霉羧肽酶Y酶学性质
资助基金：国家自然科学基金(31400078)江苏省产学研联合创新资金前瞻性联合研究项目(BY2014023-21)
论文发表日期：2017-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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