曲霉N1-14’高产L-苹果酸相关基因的克隆与分析
乐贤松1
吴军林2
吴清平3
张菊梅3
郭伟鹏3
1.中国科学院南海海洋研究所,广东广州510301;广东省微生物研究所,省部共建华南应用微生物国家重点实验室,广东省菌种保藏与应用重点实验室,广东省微生物新技术公共实验室,广东广州510070;中国科学院大学,北京1000492.广东省微生物研究所,省部共建华南应用微生物国家重点实验室,广东省菌种保藏与应用重点实验室,广东省微生物新技术公共实验室,广东广州510070;广东环凯微生物科技有限公司,广东广州5106433.广东省微生物研究所,省部共建华南应用微生物国家重点实验室,广东省菌种保藏与应用重点实验室,广东省微生物新技术公共实验室,广东广州510070
摘要：为了解曲霉(Aspergillus sp.)N1-14’的高产L-苹果酸(LMA)机制,提取其总DNA作模板,设计同源引物扩增包含丙酮酸羧化酶基因(pyc)和苹果酸脱氢酶基因(mdh)全长的片段并测序,再参考测序结果找到丙酮酸羧化酶(PYC)和苹果酸脱氢酶(MDH)的编码区,设计引物从Nl-14’总cDNA扩增出其编码序列并通过TA克隆测序.测序结果显示pyc基因编码区长3582 bp,编码l193aa,分析结果显示PYC氨基酸序列在曲霉属内相当保守,同源性高达90％以上,其中Nl-14’在两个保守位点出现突变,833位的A位于一个环区和1022位的F位于α-螺旋中部,可能与其高产酸活性相关;mdh编码区全长1023bp,编码340aa.MDH氨基酸序列高度保守,突变株同样有两个保守区出现氨基酸点突变,且两点均出现在α-螺旋区域.本试验主要克隆两个曲霉N1-14’产L-苹果酸通路关键酶基因,分析其种属的特异性及预测特异氨基酸位点的功能,为继续探究N1-14’的高产LMA机制及相应的基因工程改造提升产酸水平奠定基础.
关键词：曲霉N1-14’PYCMDH序列分析
资助基金：国家自然科学基金(31271940)
论文发表日期：2017-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 76-82 )
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