特氏杜氏藻中乙酰辅酶A合成酶的基因克隆、表达、纯化及活性测定
金宏昊
梁明华
姜建国
1.华南理工大学食品科学与工程学院,广东广州,5106402.华南理工大学食品科学与工程学院,广东广州,5106403.华南理工大学食品科学与工程学院,广东广州,510640
摘要：乙酰辅酶A合成酶(ACS)催化合成乙酰辅酶A,它是油脂代谢和醋酸盐代谢的重要节点之一.本研究利用反转录PCR(RT-PCR)技术和cDNA末端快速扩增(RACE)技术分离得到了特氏杜氏藻(Dunaliella tertiolecta)乙酰辅酶A合成酶(DtACS)的cDNA全长(2464 bp),预测其开放阅读框(ORF)为2184 bp,727个氨基酸由此段编码.序列比对显示DtACS与绿藻ACS最为相似(与衣藻Chlamydomonas reinhardtii有68％一致;与团藻Volvox carterif.nagariensis有70％一致).选用带有硫氧还蛋白标签(Trx-tag)的pET32a(+)作为原核表达载体,并将DtACS转入pET32a(+)中从而构建了pET-32a-DtACS质粒.将其转入BL21(DE3)感受态细胞中,同时将pET-32a空载体也转入BL21(DE3)感受态细胞中,分别得到重组菌pET-32a-DtA CS-BL211(DE3)和对照菌种pET-32a-BL21(DE3).将重组菌在18℃、终浓度为0.6 mmol/L的IPTG条件下诱导12h,表达出来的带有Trx-His标签融合蛋白的DtACS约为8.74 ku(6.99ku+1.75 ku).此外,将表达得到的重组蛋白经Ni2+亲和层析柱纯化,纯化后蛋白比活力为52.87 U/mg.
关键词：乙酰辅酶A合成酶特氏杜氏藻基因克隆纯化比酶活
资助基金：国家自然科学基金(31171631)
论文发表日期：2017-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 67-73 )
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