小麦蛋白质二硫键异构酶的毕赤酵母表达及重组酶性质研究
曹佩1
卫娜2
刘光1
王敬敬1
徐勇2
胡松青1
1.华南理工大学食品科学与工程学院,广东广州510640;广东省天然产物绿色加工与产品安全重点实验室,广东广州5106402.广东省食品工业研究所,广东广州,510308
摘要：为开发天然健康的酶制剂型面粉改良剂,利用毕赤酵母表达了小麦蛋白质二硫键异构酶(wheat protein disulfide isomerase,wPDI).以克隆质粒pMD 19-T-wpdi为基因模板,亚克隆至毕赤酵母表达载体pPIC9K中,并以毕赤酵母GS115为宿主菌进行真核表达,表达产物经硫酸铵沉淀和阴离子交换层析纯化后,与大肠杆菌重组wPDI的酶学性质进行了比对,并利用粉质仪探究了重组wPDI对面粉品质的影响.结果表明,克隆的wpdi基因含有1347个碱基,共编码449个氨基酸,分子量约为50.2 ku.Westem blot结果显示,构建的重组酵母表达系统成功表达了重组wPDI;阴离子交换层析获得的wPDI的酶学性质研究表明,酵母重组wPDI表现出了二硫键氧化还原活性和分子伴侣活性,其还原活性高于大肠杆菌重组wPDI,氧化活性和分子伴侣活性低于大肠杆菌重组wPDI.粉质实验结果表明,相对于大肠杆菌重组wPDI,酵母重组wPDI表现出了更强的弱化面粉加工品质能力.研究结果为wPDI的深入研究及其在面制品中的应用奠定了基础.
关键词：小麦蛋白质二硫键异构酶毕赤酵母克隆表达酶学性质粉质特性
资助基金：国家自然科学基金(31471691)广州市科技计划(201604020032)高等学校博士学科点专项科研基金(20130172110018)广东省科技计划(2014A010107002)佛山市科技计划(2015AG10011)
论文发表日期：2017-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：9( 77-84,108 )
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