人对氧磷酶1在巴斯德毕赤酵母中的表达与纯化
于子桐
廖一波
叶燕锐
1.华南理工大学生物科学与工程学院,广东广州,5100062.华南理工大学生物科学与工程学院,广东广州,5100063.华南理工大学生物科学与工程学院,广东广州,510006
摘要：人对氧磷酶1(Human Paraoxonase 1,hPON1)是人体血液中的一种非专一性酯酶,可以水解多种有机磷化合物,被认为是一种有机磷农药中毒的解毒剂.为了得到较纯的具有活性的hPON1,本文采用巴斯德毕赤酵母Pichia pastoris表达系统,对hPON1进行胞内表达.hPON1基因经过密码子优化后克隆至pPICZA表达载体上,构建得到pPICZA-PON1重组表达质粒,经线性化后转化至巴斯德毕赤酵母X33菌株中,筛选得到阳性重组菌株.将重组菌株进行摇瓶发酵120 h,酶活达0.15 U/mL.收集发酵液并细胞裂解后,用Ni-NTA螯合亲和层析的方法进行纯化,得到纯化的hPONl,SDS-PAGE结果显示表达产物的大小约37 ku,与预期的蛋白分子量相符.表达的重组hPON1的最适反应温度为45℃,最适pH为9.0.以上结果表明,本研究成功地表达并得到较纯的有活性的hPON1蛋白.
关键词：人对氧磷酶1巴斯德毕赤酵母密码子优化胞内表达
资助基金：华南理工大学中央高校基本科研业务费(2014ZM0056)
论文发表日期：2017-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 85-89,8 )
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