鉴定活性维生素D细胞模型的构建
程佳
王永吉
1.陕西理工大学维生素D生理与应用研究所,陕西汉中72 30002.陕西理工大学维生素D生理与应用研究所,陕西汉中72 3000
摘要：本文构建了维生素D受体(VitaminD receptor,VDR)融合蛋白的真核表达载体,并获得稳定表达VDR融合蛋白的细胞体系,为含有活性维生素D食品及药物的鉴定建立成熟的细胞模型.设计并合成特异性引物扩增VDR基因,将扩增产物克隆至pcDNA3.1/His真核表达载体上,将其转染HEK293细胞.采用免疫沉淀(IP)技术鉴定VDR融合蛋白的表达效率.在构建pcDNA 3.1/VDR-His成功的基础上,用活性1,25(OH)2D3处理转染的细胞,收集总蛋白和mRNA,分别利用免疫印迹(Western blot,WB)和实时定量PCR(qRT-PCR)技术,检测VDR融合蛋白以及其下游基因CYP24A1基因的表达.IP结果证实VDR融合蛋白具有转录活性.WB和qRT-PCR结果显示,1 nmol/L浓度的活性1,25(OH)2D3处理转染细胞能有效激活VDR蛋白的表达,以及显著增强CYP24A1的mRNA表达(p＜0.01).利用该细胞模型检测维生素D类药物的活性,结果显示不同药物中维生素D的活性与药物种类有关.pcDNA3.1/VDR-His融合表达载体构建成功,并以此构建了鉴定活性维生素D的细胞模型.
关键词：维生素D受体融合蛋白细胞模型
资助基金：陕西省教育厅专项科研计划项目(12JS029)陕西省科技创新团队项目(2012KCT-29)
论文发表日期：2017-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 36-40 )
英文信息