脱氮硫杆菌ATCC25259 SQR蛋白及突变体的结构分析与活性研究
陈新
孟志忠
罗义
荣向
李杉
1.华南理工大学生物科学与工程学院,广东广州,5100062.华南理工大学生物科学与工程学院,广东广州,5100063.华南理工大学生物科学与工程学院,广东广州,5100064.华南理工大学生物科学与工程学院,广东广州,5100065.华南理工大学生物科学与工程学院,广东广州,510006
摘要：本文研究了通过Discovery Studio 3.5利用同源建模法构建了脱氮硫杆菌ATCC25259的硫化物:醌氧化还原酶(Sulfide:quinone oxidoreductase,SQR)野生型蛋白及突变体蛋白模型,通过GROMACS 5.1.2对所有模型进行分子力学及分子动力学的优化,使蛋白模型处于能量较低且结构稳定的状态.使用PROCHECK,Verify 3D和ProSA三种模型评价方法对模型进行评价,表明蛋白模型具有较高的合理性.使用该蛋白模型计算蛋白相互作用、SAS及能量值.将构建好的SQR及突变体的表达载体转入大肠杆菌BL21 (DE3)诱导表达分子量约65 ku的蛋白.使用镍柱亲和层析纯化经大量表达含有6×His标签的野生型与突变体蛋白,采用已经建立的SQR活性测定方法,进行酶活性测定实验,结果表明突变体酶活性较低.从模拟计算与实验验证两方面说明SQRC端α螺旋结构对蛋白的结构稳定性具有重要影响,蛋白结构稳定性降低,从而酶活性降低.
关键词：分子动力学脱氮硫杆菌硫化物:醌氧化还原酶诱导表达
资助基金：广州市产学研协同创新重大专项(201508020110)
论文发表日期：2017-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：10( 46-55 )
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