cp4-epsps基因在毕赤酵母中的表达及鉴定
赵慧
毛碧绮
梁治成
龚石娣
1.华南农业大学材料与能源学院,广东广州,5106402.华南农业大学材料与能源学院,广东广州,5106403.华南农业大学材料与能源学院,广东广州,5106404.华南农业大学材料与能源学院,广东广州,510640
摘要：为建立一种新的外源蛋白安全评估方法,构建转外源基因酵母是关键步骤.本研究以来源于转基因作物的抗除草剂合成酶蛋白CP4-EPSPS为研究模板,首先通过基因优化和化学合成获得cp4-epsps基因,优化后基因密码子适周性指数(CAD为0.85,GC含量为52％.目的基因克隆至毕赤酵母表达载体pPICZb,经鉴定筛选正确的重组载体pPICZb-EPSPS电击转化至毕赤酵母GS115,cp4-epsps基因通过同源重组方式整合至酵母基因组,PCR扩增酵母基因组筛选得到在正确位点发生同源重组的4株阳性菌株.随后,各阳性菌株分别于28℃、250～300 r/min培养,0.5％甲醇诱导4d后,提取各组菌株总蛋白,采用SDS-PAGE和western blotting鉴定CP4-EPSPS表达的正确性.CP4-EPSPS单克隆抗体及载体标签C-MYC单克隆抗体的westemblotting结果一致显示cp4-epsps基因在毕赤酵母GS115中成功获得表达,大小约50 ku.本实验成功构建了转cp4-epsps基因的毕赤酵母基因工程菌,为下一步开展转基因作物CP4-EPSPS成份的安全评价奠定基础.
关键词：转基因作物外源蛋白安全评价cp4-epsps基因毕赤酵母
资助基金：环保部公益性行业科研专项(201509044)感谢中国留学基金管理委员会资助(201608440425)
论文发表日期：2017-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 55-62 )
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