荧光素酶表达载体构建及其在巴斯德毕赤酵母的表达
罗展浩1
吴清平2
张菊梅2
丁郁3
李程思2
潘力4
吴慧清2
1.华南理工大学生物科学与工程学院,广东广州 510006;广东省微生物研究所,省部共建华南应用微生物国家重点实验室,广东省菌种保藏与应用重点实验室,广东省微生物应用新技术公共实验室,广东广州 5100702.广东省微生物研究所,省部共建华南应用微生物国家重点实验室,广东省菌种保藏与应用重点实验室,广东省微生物应用新技术公共实验室,广东广州 5100703.暨南大学理工学院食品科学与工程系,广东广州,5106324.华南理工大学生物科学与工程学院,广东广州,510006
摘要：萤火虫荧光素酶(Firefly Luciferase,FL)是ATP快速检测技术的核心组件,通过荧光强度与ATP浓度的对应关系,在食品行业检测微生物数量发挥着重大作用.本文为实现荧光素酶在重组毕赤酵母GS115中的异源表达,通过从载体pGL2-control中扩增荧光素酶基因luc,克隆到真核表达载体pPIC9K中,线性化后电击转化毕赤酵母GS1l5菌株,筛选阳性重组菌株.在甲醇的诱导下进行酶的表达,对粗酶液进行生物活性发光分析,然后对粗酶进行超滤、阴离子层析和分子筛凝胶层析三步纯化.甲醇诱导表达96 h发现胞外和胞内粗酶液均有相对较高的酶发光活性,酶活分别为1.45×106 RLU/mL和1.58× 109 RLU/mL.SDS-PAGE与Western blot分析重组荧光蛋白大小约为70 ku,最终纯化得到的荧光素酶,其比活为7.0× 108 RLU/mg,纯化倍数达到19.3倍,产量为48 mg/L.以上结果表明,荧光素酶能够在毕赤酵母表达系统获得较好的表达和纯化效果.
关键词：ATP生物发光真核表达荧光素酶毕赤酵母纯化
资助基金：国家高技术研究发展计划（863计划）(2013AA102202)广州市科技计划(201504010036)广州市科技计划(201604016068)广州市科技计划(201604020005)
论文发表日期：2018-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：9( 88-96 )
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