CRISPR/Cas9介导的酿酒酵母ADH2基因中断及反义RNA干扰GPD1的表达
刘奎
梁丽敏
李振辉
叶浩盈
潘艳飞
何文锦
陈由强
薛婷
1.福建师范大学海洋生物医药与制品产业化开发技术公共服务平台,福建师范大学南方海洋研究院福建省微藻种质改良工程技术研究中心,福建福州3501172.福建师范大学海洋生物医药与制品产业化开发技术公共服务平台,福建师范大学南方海洋研究院福建省微藻种质改良工程技术研究中心,福建福州3501173.福建师范大学海洋生物医药与制品产业化开发技术公共服务平台,福建师范大学南方海洋研究院福建省微藻种质改良工程技术研究中心,福建福州3501174.福建师范大学海洋生物医药与制品产业化开发技术公共服务平台,福建师范大学南方海洋研究院福建省微藻种质改良工程技术研究中心,福建福州3501175.福建师范大学海洋生物医药与制品产业化开发技术公共服务平台,福建师范大学南方海洋研究院福建省微藻种质改良工程技术研究中心,福建福州3501176.福建师范大学海洋生物医药与制品产业化开发技术公共服务平台,福建师范大学南方海洋研究院福建省微藻种质改良工程技术研究中心,福建福州3501177.福建师范大学海洋生物医药与制品产业化开发技术公共服务平台,福建师范大学南方海洋研究院福建省微藻种质改良工程技术研究中心,福建福州3501178.福建师范大学海洋生物医药与制品产业化开发技术公共服务平台,福建师范大学南方海洋研究院福建省微藻种质改良工程技术研究中心,福建福州350117
摘要：CRISPR/Cas9是一个简单、高效的用于靶向目的基因和无标记的基因组工程的工具.本文通过构建酿酒酵母沉默组件PGK-SGPD1-CYC1,使甘油-3-磷酸脱氢酶Ⅰ(Glycerol-3-phosphate dehydrogenase,GPD1)基因在PGK强启动子、CYC1终止子在特定区域内进行干扰和表达.应用CRISPR/Cas9基因编辑技术,在中断乙醇脱氢酶Ⅱ(alcohol dehydrogenase Ⅱ,ADH2)基因的同时,定点敲入GPD1基因的反义干扰组件,从而特定地干扰GPD1的表达.采用高效的酵母化学转化法将反应组件敲入酿酒酵母Y1H中,CRISPR/Cas9介导的同源重组效率达43.48％,由此获得了ADH2基因中断和GPD1反义干扰的酿酒酵母突变株.发酵实验结果表明,酿酒酵母突变菌株SG1-1与出发菌株Y1H相比,乙醇产率提高了9.07％,甘油产率下降了12.05％,乙酸产率下降了12.30％,结果表明通过中断ADH2基因及插入GPD1反义干扰组件,既能够中断ADH2基因的功能,减少乙醇转化为乙醛,同时也能在一定程度上千扰GPD1基因的表达,提高乙醇产率.
关键词：酿酒酵母中断乙醇脱氢酶Ⅱ基因中断甘油-3-磷酸脱氢酶Ⅰ
资助基金：福建省自然科学基金(2017J01622)福建省教育厅项目(A类)(JAT160114)国家糖料产业技术体系项目(CARS-170501)
论文发表日期：2018-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 64-71 )
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