皱褶假丝酵母脂肪酶CRL1在毕赤酵母中的高效表达及其催化合成维生素E醋酸酯
郝月绰
林影
梁书利
1.华南理工大学生物科学与工程学院,广东广州,5100062.华南理工大学生物科学与工程学院,广东广州,5100063.华南理工大学生物科学与工程学院,广东广州,510006
摘要：本研究将经密码子优化的皱褶假丝酵母脂肪酶(Candida rugosa lipase) CRL1基因克隆到毕赤酵母分泌型表达载体pHKA,构建得到重组菌株GS115/pHKA-CRL1;经摇瓶发酵并结合甲醇诱导120 h处理,该菌株对底物对硝基苯酚丁酯(pNPB)的水解活力达到39.73 U/mL.通过对AOX1启动子和α分泌信号肽同时进行改造,进一步获得重组菌株GS 115/pHKA-AOX1m/αm-CRL1,其脂肪酶活力提高达到63.63 U/mL.发酵液上清液经超滤浓缩、硫酸铵沉淀后,再经脱盐和阴离子交换层析处理,获得纯化的重组CRL1.该纯化工艺的纯化倍数为5.41倍,回收率为33.81％.而纯化重组CRL1的比酶活为984.5 U/mg.重组CRL1的最适温度为40℃,最适pH为7.5;经40℃保温6h,仍保留52.99％的相对活力;在偏酸性环境中较为稳定.以摇瓶发酵、真空冷冻干燥后的重组CRL1为催化剂,在无溶剂体系中催化合成维生素E醋酸酯,在最适反应条件下(200 mg D-α-生育酚、1mL乙酸酐、100 mg CRL1、反应温度60℃、转速200 r/min、反应时间9h),D-α-生育酚的转化率在97.00％以上.
关键词：皱褶假丝酵母脂肪酶毕赤酵母蛋白纯化酶学性质维生素E醋酸酯
资助基金：国家自然科学基金(30471225)中央高校基本科研业务费专项(2017MS103)
论文发表日期：2018-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 126-132,187 )
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