18S rDNA介导的桔青霉核酸酶P1表达载体的构建及表达分析
陈筱仪
王斌
潘力
1.华南理工大学生物科学与工程学院,广东省发酵与酶工程重点实验室,广东广州5100062.华南理工大学生物科学与工程学院,广东省发酵与酶工程重点实验室,广东广州5100063.华南理工大学生物科学与工程学院,广东省发酵与酶工程重点实验室,广东广州510006
摘要：本研究采用黑曲霉Bdel4菌株为宿主菌,敲除glaA,aamA,An05g02100和An12g06930四个主要的胞外分泌蛋白,为核酸酶P1的表达和分泌提供通路.通过PCR扩增得到黑曲霉Bdel4的rDNA序列,构建了以rDNA序列为整合位点的重组质粒pRpT-nucP1-18S和pRpT-2A-nucP1-18S,将构建的重组质粒pRpT-nucP1-18S和pRpT-2A-nucP1-18S转入黑曲霉Bdel4.通过半荧光定量PCR进行转化子初筛,之后测定核酸酶P1的酶活复筛,选出一株高活性菌株用于工业生产.采用SYBR Green实时荧光定量PCR法对含外源目的基因nuc P1的总基因组样本重复检测,取平均值作为目的基因拷贝数,探究其与酶活表达水平之间的联系.结果 显示含9个nucP1基因拷贝数的菌株的酶活水平达到88.5 U/mL,较核酸酶P1单拷贝菌株增加了3.86倍,较之前研究中异源表达核酸酶产量提高1.20倍,再增加nuc P1的拷贝数时,酶活水平随着拷贝数的增加而降低.
关键词：核酸酶P1黑曲霉SYBR Green实时荧光定量PCR拷贝数
资助基金：国家自然科学基金(31871736)国家自然科学基金(31870024)广东省自然科学基金(2017A030313097)国家重点实验室开放基金(2017B030302002)
论文发表日期：2019-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：9( 145-153 )
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