单核细胞增生李斯特菌ladR基因在两种原核表达载体中的克隆表达及纯化分析
陈月桃1
陈谋通2
吴清平2
张菊梅2
程健恒2
孙奇凡2
王涓3
1.广东省微生物研究所,广东省科学院;华南应用微生物国家重点实验室;广东省菌种保藏与应用重点实验室;广东省微生物应用新技术公共实验室,广东广州,510070;华南农业大学食品学院,广东广州,5106422.广东省微生物研究所,广东省科学院;华南应用微生物国家重点实验室;广东省菌种保藏与应用重点实验室;广东省微生物应用新技术公共实验室,广东广州,5100703.华南农业大学食品学院,广东广州,510642
摘要：利用特异性引物扩增ladR基因序列,分别构建单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)ladR基因的两种原核表达载体,即含有6个His标签的pET-28a-ladR表达载体和含有GST标签的pGEX-4T-ladR表达载体.通过诱导时间、温度和浓度优化两种表达载体的蛋白表达条件,比较分析两种表达载体的LadR蛋白可溶性表达水平,利用Western-Blot进行LadR蛋白表达验证.本研究成功构建了pET-28a-ladR和pGEX-4T-ladR表达载体,在大肠杆菌BL21中分别表达出His-LadR和GST-LadR融合蛋白.通过凝血酶切除GST标签,纯化后得到LadR蛋白.在最佳表达条件IPTG为0.5 mmol/L,22℃诱导过夜下,pGEX4T-ladR表达载体中LadR的表达量比pET-28a-ladR(IPTG为1.0 mmol/L,22℃诱导过夜)中His-LadR蛋白的表达量高4.48倍.本研究结果表明,GST标签有利于ladR基因的可溶性表达,为后续的LadR蛋白的功能分析和转录调控机理研究奠定了良好基础.
关键词：单增李斯特菌LadR蛋白原核表达蛋白纯化
资助基金：基础研究项目(2017A030313173)国家自然科学基金(31701718)广州市珠江科技新星专项(201710010018;2017GDASCX-0201)
论文发表日期：2019-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 58-65 )
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