分子伴侣共表达对核糖核酸酶R可溶性表达的影响
李轲
李站胜
韩双艳
华南理工大学生物科学与工程学院,广东广州,510006
摘要：核糖核酸外切酶R(RNaseR)可降解几乎所有的线性RNA分子和Y结构RNA,但不易降解环形RNA(circRNA)、套索结构(lariat RNA)和3’突出末端少于7个核苷酸的双链RNA分子,因此可以构建内含子cDNA文库用于可变剪切研究.本研究构建了含rnr基因的重组表达质粒pET-22b(+)-rnr,并将其表达产物纯化后通过SDS-PAGE分析和酶活性评价,确认rnr基因在大肠杆菌中已实现表达.之后构建4种分子伴侣共表达系统(pGro7、pKJE7、pTf16和pG-Tf2).4种分子伴侣质粒分别与重组表达质粒pET-22b(+)-rnr共表达,筛选最适分子伴侣质粒,并优化共表达条件,提高目的蛋白可溶性表达.实验表明,分子伴侣质粒pGro7使蛋白表达量提高了43.80％,效果最为显著;20℃诱导时目的蛋白的可溶性表达最高;当L-阿拉伯糖浓度为0.50 mg/mL时,分子伴侣质粒pGro7使蛋白表达量提高了54.50％.通过使用分子伴侣共表达系统及优化表达条件提高了RNase R的可溶性表达,为该酶进一步研究奠定了基础.
关键词：RNase R可溶性表达分子伴侣共表达系统
资助基金：国家科技支撑计划项目(2012AA022205)
论文发表日期：2019-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 93-99 )
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