大肠杆菌植酸酶AppA在毕赤酵母中的高效表达
高娇
郑学云
林影
梁书利
1.华南理工大学生物科学与工程学院,广东省发酵与酶工程重点实验室,广东广州5100062.华南理工大学生物科学与工程学院,广东省发酵与酶工程重点实验室,广东广州5100063.华南理工大学生物科学与工程学院,广东省发酵与酶工程重点实验室,广东广州5100064.华南理工大学生物科学与工程学院,广东省发酵与酶工程重点实验室,广东广州510006
摘要：本研究全基因合成大肠杆菌B48来源的植酸酶AppA基因,并将它克隆到PHKA载体上,在毕赤酵母GS115中进行分泌表达.为了进一步提高毕赤酵母中植酸酶的表达量,本研究结合信号肽、启动子、基因剂量和蛋白质折叠通量优化的方法,最终将毕赤酵母中植酸酶的活力从329.41U/mL提高到了1892.51U/mL,是初始菌株的5.75倍.初步测定了植酸酶AppA的基本酶学性质,其最适温度和pH分别为60℃和4.5;在60℃处理60 min后,植酸酶活力剩余40％,温度稳定性较差;在pH 6.0～7.0处理6h后,酶活力剩余87％,该酶在弱酸环境中有较好的稳定性;同时研究了二价金属离子对植酸酶活力的影响,Fc2+能够激活植酸酶AppA的活力,而Cu2+、Ni2+、Mn2+等离子通过与植酸形成络合物而抑制植酸酶AppA的活力.该酶在酸性条件下的强稳定性有利于将其应用于食品加工领域.
关键词：毕赤酵母植酸酶表达元件基因剂量调控因子
资助基金：国家自然科学基金(31400062)
论文发表日期：2019-12-15
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 137-144 )
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